Gyakorlati folyadékkromatográfia (RPLC) és módszeroptimalizálás (elmélet, 3 nap)
Alapösszefüggések, alapfogalmak
A folyadékkromatográfia műszerezettsége, a gyors folyadékkromatográfia megvalósítási
lehetőségei
- mozgófázis szállító rendszerek, mintaadagolás
- készülékjellemzők (késleltetési- és kolonnán kívüli térfogatok jelentősége)
- módszertranszfer (UHPLC ↔ HPLC)
- 2 µm alatti szemcsés töltetek (készülék és kolonna kritériumok)
- héjszerkezetű töltetek, monolitok, emelt hőmérséklet
- detektálás
- UV/vis (hullámhossz választás, fix hullámhossz vagy UV spektrum)
- (SQ) MS (ESI ionizáció, QDa detektor, MS kompatibilis mozgófázisok,
spektrumfejtési segédlet, komponensek azonosítása)
Fordított fázisú folyadékkromatográfia (RPLC)
- állófázisok és jellemzésük
- hogyan válasszunk megfelelő állófázist
- állófázisok felcserélhetősége, kolonnatesztek
- mozgófázisok és jellemzésük
- mozgófázis pH-kontroll szerepe
Módszeroptimalizálás és retenció modellezés
- gradiens elúció
- hőmérséklet hatása az elválasztásra
- pH hatása az elválasztásra
- terner mozgófázis összetétel hatása az elválasztásra
- pKa, LogP, LogD előrejelzése
- számítógépes módszeroptimalizálás
Egyszerű és összetett RPLC módszeroptimalizálás esettanulmányok konkrét példákon keresztül
bemutatva
- izokratikus vs. gradiens elúció
- optimális állófázis választás
- mozgófázis optimálás
- módszertranszfer (UHPLC ↔ HPLC)
- alternatív állófázis választás
- gyógyszeranalitikai szennyezésprofil vizsgálat
Terápiás fehérjék RPLC-s vizsgálata
- terápiás fehérjék folyadékkromatográfiás vizsgálati módszerei
- állófázissal szemben támasztott követelmények
- mozgófázissal szemben támasztott követelmények
- detektálási lehetőségek
- módszeroptimalizálás
Gyakorlati folyadékkromatográfia (RPLC) és módszeroptimalizálás
(laboratóriumi gyakorlat, 2 nap)
Készülékjellemzők
- pumparendszerek áttekintése
- gradiens késési térfogat meghatározása
- kolonnán kívüli térfogat meghatározása
- mintaadagolási módok vizsgálata
- detektorbeállítások
Állófázisok
- kolonnatesztek
- tömeg és térfogat túlterhelés vizsgálata
- oldószererősség hatásának vizsgálata
- kinetikai hatékonyság vizsgálata eltérő típusú állófázisokon
- eltérő szelektivitású állófázisok vizsgálata
Módszeroptimalizálás (RPLC)
- izokratikus vs. gradiens elúció
- kromatográfiás paraméterek (%B, T, pH, gradiens) hatása az elválasztásra
- DryLab szofver használata
Módszertranszfer
- HPLC ↔ UHPLC
- (U)HPLC ↔ (U)HPLC (bináris vs. kvaterner rendszerek)